實(shí)驗(yàn)原理
平板菌落計(jì)數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的現(xiàn)象進(jìn)行的，也就是說一個(gè)菌落即代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，先將待測(cè)樣品作一系列稀釋，再取一定量的稀釋菌液接種到培養(yǎng)皿中，使其均勻分布于平皿中的培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可換算出樣品中的含菌數(shù)。
這種計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是能測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。此法常用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑），生物制品檢定以及食品、水源的污染程度的檢定等。但平板菌落計(jì)數(shù)法的手續(xù)較繁，而且測(cè)定值常受各種因素的影響。
實(shí)驗(yàn)試劑
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
1ml無菌吸管，無菌平皿，盛有4． 5 ml無菌水的試管，試管架和記號(hào)筆等。
實(shí)驗(yàn)材料
大腸桿菌懸液
實(shí)驗(yàn)步驟
1．編號(hào)：
取無菌平皿 9套，分別用記號(hào)筆標(biāo)明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4．5ml無菌水的試管，排列于試管架上，依次標(biāo)明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀釋
用1ml無菌吸管**地吸取0．5ml大腸桿菌懸液放入10-1的試管中，注意吸管**不要碰到液面，以免吹出時(shí)，管內(nèi)液體外溢。然后仍用此吸管將管內(nèi)懸液來回吸吹三次，吸時(shí)伸入管底，吹時(shí)離開水面，使其混合均勻。另取一支吸管自10-1試管吸0．5ml放入10-2試管中，吸吹三次，……其余依次類推。整個(gè)稀釋過程如圖Ⅷ-3。
3．取樣
用3支1ml無菌吸管分別**地吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌液0．2ml，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無菌培養(yǎng)皿中。
4．倒平板
于上述盛有不同稀釋度菌液的培養(yǎng)皿中，倒入溶化后冷卻至45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基約10—15ml，置水平位置，迅速旋動(dòng)混勻，待凝固后，倒置于37℃溫室中培養(yǎng)。
5．計(jì)數(shù)
培養(yǎng)24小時(shí)后，取出培養(yǎng)皿，算出同一稀釋度三個(gè)平皿上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算：
每毫升中總活菌數(shù)=同一稀釋度三次重復(fù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×5
一般選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30—300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的菌數(shù)*為合適。同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)的菌數(shù)不能相差很懸殊。由10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度計(jì)算出的每毫升菌液中總活菌數(shù)也不能相差懸殊，如相差較大，表示試驗(yàn)不**。
注意事項(xiàng)
平板菌落計(jì)數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的，一般以三個(gè)稀釋度中的**稀釋度倒平板所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為*好。
平板菌蓓計(jì)數(shù)法的操作除上述的以外，還可用涂布平板的方法進(jìn)行。二者操作基本相同，所不同的是涂布平板法是先將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基溶化后倒平板，待凝固后編號(hào)，并于 37℃溫室中烘烤30分鐘左右，使其干燥，然后用無菌吸管吸取 0．2ml菌液對(duì)號(hào)接種于不同稀釋度編號(hào)的培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基上，再用無菌玻璃刮棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上20—30分鐘，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后再倒置于37℃的溫室中培養(yǎng)。